Abstract
Perfluoro oktansyre (PFOA) er en peroksisomal proliferator som er kjent for å også gi antiinflammatoriske reaksjoner. Virkningsmekanismen for stoffet i levende dyr er lite kjent. For å få en bedre forståelse av PFOAs virkningsmekanismer, ble det undersøkt om PFOA behandling har noen effekter på mRNA nivåer.
Total RNA ble isolert fra lever hos både villtype og PPARα knock-out hannmus, som enten var behandlet med maisolje (kontroll), eller PFOA behandlet. mRNAet ble omdannet til cDNA som ble hybridisert med immobiliserte oligonukleotider som er festet til et matriseunderlag. Mikromatriser ble anvendt for å kartlegge forandringer i genekspresjon som følge av PFOA behandling. RT-PCR ble kjørt på utvalgte primere for å kvalifisere og verifisere mikromatrise resultatene
Hann mus ble valgt fordi de skiller PFOA i lavere grad enn hunn mus. De PFOA behandlede musene ble injisert intra peritonalt med 10mg PFOA/kg kroppsvekt. Dyrene ble avlivet etter 12 dager.
Homogenater av lever, nyrer og hjerne fra villtype og knockout mus ble laget til måling av enzymaktiviteter.
Følgende målinger ble utført:
1) Total RNA ble isolert ved samtlige behandlingstyper, og anvendt til mikromatrise- og RT-PCR analyser av genekspresjon (mRNA nivåer).
2) Følgende enzymaktivitetene som ble målt: katalase, peroksisomal β-oksidasjon og karboksylesterase
Resultater fra PFOA behandlingen av villtype og PPARα knock-out mus:
Homogenater fra lever:
Aktiviteten til den peroksisomale β-oksidasjonen øker i leveren hos villtype mus som følge av PFOA behandling. Denne effekten er ikke funnet hos PPARα knock-out mus.
Det er ikke observert noe signifikant økning av katalase aktivititet verken hos villtype eller knock-out mus.
Det er derimot observert en signifikant økning av karboksylesterase aktivtitet i leveren hos villtype mus.
Homogenater fra nyrer og hjerne:
Det er ikke observert noe β-oksidasjon aktivitet hos verken villtype eller knock-out mus.
Det er heller ikke observert noe signifikant økning av katalaseaktivitet hos begge mustypene som følge av PFOA behandlingen. Det er derimot observert en signifikant økning av karboksylesteraseaktivitet i hjernen hos knock-out mus.
Gener som viste økte mRNA nivåer i leveren:
Villtype mus:
- Peroksisomale gener: Acox1 og Facl2
- Mitokondrielle gener: Acadm, Atp5c1, Atp5o, Cox4a, Cox5a, Crot, Dci, Decr1, Ech1, Gpam, Mor1, Mrp130, Ndufv2 og Timm23
- Respons gener: Cyp1a2, Cyp2a4, Cyp2c29, Cyp2j6, Cyp3a13, Cyp4a10, Cyp4a12 og Cyp4a14
PPARα knock-out mus:
- Mitokondrielle gener; Dci, Gcdh, Gfm, Mrpl54 og Timm8a
- Respons gener; Cyp1a2, Cyp2a12, Cyp2b10, Cyp2b20, Cyp2c55, Cyp2c65, Cyp3a11, Cyp3a13, Cyp4a10, Cyp4a12, Cyp4f15, Gsta1, Gsta4, Gstm1 og Gstt2
- Gener som koder for karboksylesterase enzymer; Ces1, Ces3 og Es2